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人凝血因子效价测定法

    药品名称: 3519 人凝血因子IX效价测定法
    版本: 2020年版
    来源: 四部
    分类: 通则
    内容:

    (一期法)

    本法系用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆为基质血浆,采用一期法测定供试品人凝血因子Ⅸ效价。

    试剂 (1)3.8%枸橼酸钠溶液 称取无水枸橼酸钠9.5g,加水溶解并稀释至250ml。

    (2)咪唑缓冲液(pH7.3) 称取咪唑0.68g、氯化钠1.17g,溶于100ml水中,加入0.1mol/L盐酸溶液42.2ml,再加水稀释至200ml,即得。

    (3)稀释液 取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液,混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%。

    (4)激活的部分凝血活酶(APTT)试剂。

    (5)人凝血因子Ⅸ缺乏血浆 为人凝血因子Ⅸ含量低于1%的人血浆或人工基质血浆。

    (6)0.85%~0.90%氯化钠溶液。

    (7)0.05mol/L氯化钙溶液 称取氯化钙(CaCl2·2H2O)147g,加水溶解并稀释至1000ml,配制成1mol/L氯化钙贮存液。临用前,用水稀释20倍,配制成0.05mol/L氯化钙溶液。

    人凝血因子Ⅸ标准品溶液的制备 用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆或0.85%~0.90%氯化钠溶液将标准品稀释成每1ml含1IU凝血因子Ⅸ,再用稀释液分别做10倍、20倍、40倍和80倍稀释,置冰浴待用。

    供试品溶液的制备 若供试品中含有肝素,先用硫酸鱼精蛋白中和供试品中的肝素。测定时先用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆或0.85%~0.90%氯化钠溶液稀释成每1ml约含1IU凝血因子Ⅸ,再用稀释液做10倍、20倍或40倍稀释,置冰浴待用。

    测定法 取激活的部分凝血活酶试剂0.1ml,置37℃水浴中保温一定时间(一般4分钟),加人凝血因子Ⅸ缺乏血浆0.1ml、供试品溶液0.1ml,混匀,置37℃水浴中保温一定时间(一般5分钟),加入已预热至37℃的0.05mol/L氯化钙溶液0.1ml,记录凝固时间。

    用不同稀释度的人凝血因子Ⅸ标准品溶液0.1ml替代供试品溶液,同法操作。

    以人凝血因子Ⅸ标准品溶液效价(IU/ml)的对数对其相应的凝固时间(秒)的对数作直线回归,求得直线回归方程,计算供试品溶液人凝血因子Ⅸ效价,再乘以稀释倍数,即为供试品人凝血因子Ⅸ效价(IU/ml)。

    【附注】(1)直线回归相关系数应不低于0.98。

    (2)测定时要求每个稀释度平行测定2管,2管之差不得超过均值10%,否则重测。

    (3)直接与标准品、供试品和血浆接触的器皿应为塑料制品或硅化玻璃制品。

    (4)釆用全自动凝血仪操作,按仪器使用说明书进行。

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