C256H381N65O76S6 5778 本品系自猪胰中提取制得的由51个氨基酸残基组成的蛋白质。按干燥品计算，含胰岛素（包括脱氨胰岛素）应为95.5%～105.0%。 每1单位相当于胰岛素0.0345mg。 【制法要求】本品应从检疫合格猪的冰冻胰脏中提取。生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求。本品为动物来源，工艺中应进行病毒的安全性控制。 【性状】本品为白色或类白色的结晶性粉末。 本品在水、乙醇中几乎不溶;在无机酸或氢氧化钠溶液中易溶。 【鉴别】（1）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。 （2）照高效液相色谱法（通则0512）试验。 供试品溶液 取本品适量，加0.1%三氟醋酸溶液溶解并稀释制成每1ml中含10mg的溶液，取20μl，加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液（pH7.3）20μl、0.1%V8酶溶液20μl与水140μl，混匀，置37℃水浴中2小时后，加磷酸3μl。 对照品溶液 取胰岛素对照品适量，加0.1%三氟醋酸溶液溶解并稀释制成每1ml中含10mg的溶液，取20μ1，加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液（pH7.3）20μl、0.1%V8酶溶液20μl与水140μl混匀，置37℃水浴中2小时后，加磷酸3μl。 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（5～10μm）；以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（取无水硫酸钠28.4g，加水溶解后，加磷酸2.7ml，乙醇胺调节pH值至2.3，加水至1000ml）-乙腈（90:10）为流动相A，乙腈-水（50:50）为流动相B，按下表进行梯度洗脱； 柱温为40℃；检测波长为 214nm；进样体积25μl。 测定法 精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。 结果判定 供试品溶液的肽图谱应与对照品溶液的肽图谱一致。 【检查】相关蛋白质 照高效液相色谱法（通则0512）测定。临用新制，置10℃以下保存。 供试品溶液 取本品适量，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含3.5mg的溶液。 系统适用性溶液见含量测定项下。 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（5～10μm）；以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（取无水硫酸钠28.4g，加水溶解后，加磷酸2.7ml，乙醇胺调节pH值至2.3，加水至1000ml）-乙腈（82：18）为流动相A，以乙腈-水（50:50）为流动相B，按下表进行梯度洗脱；柱温为40℃；检测波长为214nm；进样体积20μl。 系统适用性要求 调节流动相比例使胰岛素峰的保留时间约为25分钟。其他要求见含量测定项下。 测定法 精密量取供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。 限度 按峰面积归一化法计算，A21脱氨胰岛素不得大于5.0%，其他相关蛋白质总和不得大于5.0%。 高分子蛋白质 照分子排阻色谱法（通则0514）测定。 供试品溶液 取本品适量，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含4mg的溶液。 系统适用性溶液 取胰岛素单体-二聚体对照品（或取胰岛素适量，置60℃放置过夜），加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含4mg的溶液。 色谱条件 以亲水改性硅胶为填充剂（3～10/m）；以冰醋酸-乙腈-0.1%精氨酸溶液（15:20：65）为流动相；流速为每分钟0.5ml；检测波长为276nm；进样体积100μl。 系统适用性 要求系统适用性溶液色谱图中，胰岛素单体峰与二聚体峰的分离度应符合要求。 测定法 精密量取供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。 限度 除去保留时间大于胰岛素峰的其他峰面积，按峰面积归一化法计算，保留时间小于胰岛素峰的所有峰面积之和不得大于1.0%。 干燥失重 取本品约0.20g，精密称定，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过10.0%（通则0831）。 锌 照原子吸收分光光度法（通则0406第一法）测定。 供试品溶液 取本品适量，精密称定，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液。 对照品溶液 精密量取锌单元素标准溶液（每1ml中含1000μg）适量，用0.01mol/L盐酸溶液分别定量稀释制成每1ml中含锌0.20μg、0.40μg、0.60μg、0.80μg、1.0/μg与1.2μg的溶液。 测定法 精密量取对照品溶液和供试品溶液，在213.9nm的波长处测定吸光度，按标准曲线法计算。 限度 按干燥品计算，含锌量不得过1.0%。 细菌内毒素 取本品，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并用检查用水稀释制成每1ml中含5mg的溶液，依法检查（通则1143），每1mg胰岛素中含内毒素的量应小于10EU。 微生物限度 取本品0.3g，照非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法（通则1105）检查，1g供试品中需氧菌总数不得过300cfu。 生物活性 取本品适量，照胰岛素生物测定法（通则1211）试验，实验时每组的实验动物数可减半，实验采用随机设计，照生物检定统计法（通则1431）中量反应平行线测定随机设计法计算效价，每1mg的效价不得少于15单位。 【含量测定】照高效液相色谱法（通则0512）测定。临用新制，或2～4℃保存，48小时内使用。 供试品溶液 取本品适量，精密称定，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含40单位的溶液。 对照品溶液 取胰岛素对照品适量，精密称定，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含40单位的溶液。 系统适用性 溶液取胰岛素对照品，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含40单位的溶液，室温放置至少24小时。 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（5～10μm）；以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（取无水硫酸钠28.4g，加水溶解后，加磷酸2.7ml，乙醇胺调节pH值至2.3，加水至1000ml）-乙腈（74:26）为流动相;柱温为40℃;检测波长为214nm；进样体积20μ1。 系统适用性 要求系统适用性溶液色谱图中，胰岛素峰与A21脱氨胰岛素峰（与胰岛素峰的相对保留时间约为1.2）之间的分离度应不小于1.8，拖尾因子应不大于1.8。 测定法 精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以胰岛素峰面积与A21脱氨胰岛素峰面积之和计算。 【类别】降血糖药。 【贮藏】遮光，密闭，在一15℃以下保存。 【制剂】（1）胰岛素注射液（2）精蛋白锌胰岛素注射液（3）精蛋白锌胰岛素注射液（30R） |
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