本品为生物制品生产过程中使用的原材料，系由高效表达胰蛋白酶基因的重组菌，经发酵、分离和纯化后获得的重组猪胰蛋白酶，含适宜稳定剂，不含抑菌剂。可为浓缩的酶溶液和冻干粉两种。 性状 溶液为无色至淡黄色澄清液体。冻干粉为白色或类白色结晶性粉末。 鉴别 取约2mg重组胰蛋白酶，置白色点滴板上，加对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐试液0.2ml，搅匀，即显紫色。 蛋白质含量 依法测定（通则0731第六法）。 以0.01mol/L盐酸溶液、0.02mol/L氯化钙溶液（pH值2.0±0.2）缓冲液为空白对照，将样品用缓冲液溶解或稀释至约0.5mg/ml，取光程为1cm的带盖石英比色杯，照紫外-可见分光光度法（通则0401）在280nm的波长处，测定吸光度值。 蛋白质浓度按下式计算： 式中df为供试品稀释倍数； A280为供试品溶液在280nm下扣除空白对照后的吸光度值。 重组胰蛋白酶活性 照二部“胰蛋白酶”效价测定项检测。 比活性 指每1mg质量的蛋白质中所含重组胰蛋白酶的活性，应不低于3800U/mg蛋白质。 式中C为重组胰蛋白酶的蛋白质浓度，mg/ml。 纯度 照高效液相色谱法（通则0512）测定，面积归一化法计算重组胰蛋白酶纯度，β-胰蛋白酶不低于70%，α-胰蛋白酶不高于20%。 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合多孔硅胶填充色谱柱（ODS柱），柱直径4.6mm，长25cm；粒度3μm，孔径20nm，柱温：40℃。以1ml磷酸（85%）用水定容到1000ml为流动相A液，以1ml磷酸（85%）用乙腈定容到1000ml为流动相B液，梯度洗脱（梯度表），流速为1.0ml/min，检测波长为280nm。重组胰蛋白酶标准品主峰的保留时间是12~17分钟，α-胰蛋白酶和β-胰蛋白酶的分离度应不小于1。 供试品溶液的制备：取适量重组胰蛋白酶，用0.01mol/L盐酸溶液、0.02mol/L氯化钙溶液（pH值2.0±0.2）配制成70mg/ml±10mg/ml，转移至HPLC进样瓶中。 标准品：取100μl重组胰蛋白酶标准品溶液，混匀，转移至HPLC进样瓶中。 测定法：取标准品溶液和供试品溶液各1μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。面积归一化法计算胰蛋白酶纯度，积分时间为25分钟，扣除空白对照。α-胰蛋白酶如有前肩峰采用垂直积分，β-胰蛋白酶如有拖尾峰釆用切线积分。 微生物限度 依法检查（通则1105）重组胰蛋白酶，菌落总数不超过100cfu/ml。 |
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