试剂 (1)醋酸-醋酸钾缓冲液 取醋酸钾14g,冰醋酸20.5ml,再加水稀释至1000ml。 (2)磷酸盐缓冲液 取磷酸二氢钠2.5g、无水磷酸氢二钠1.0g与氯化钠8.2g,加水溶解至1000mL。 (3)水解明胶 取明胶50g,加水1000ml,在121℃加热90分钟,然后冷冻干燥。 (4)水解明胶稀释液 取磷酸盐缓冲液与水各250ml,加水解明胶330mg,摇匀,在0~4℃保存。如溶液不发生浑浊,可继续使用。 (5)血清贮备液 取新鲜牛血清或冻干牛血清(先用水溶解并稀释至标示量体积)1份,加醋酸-醋酸钾缓冲液9份稀释,再以4mol/L盐酸溶液调节pH值至3.1,放置18~24小时后再用。在0~4℃保存,可应用30日。 (6)血清溶液 血清贮备液中血清总固体(取牛血清适量,置装有洁净砂粒并在105℃干燥至恒重的坩埚中,置水浴上蒸干后,再在105℃干燥至恒重)在8%左右者,取1份,用醋酸-醋酸钾缓冲液3份稀释;血清总固体在5%左右者,取1份,用醋酸-醋酸钾缓冲液2份稀释。临用时制备。 (7)玻璃酸钾贮备液 取预先经五氧化二磷减压干燥48小时的玻璃酸钾,加水制成每1ml中含0.5mg的溶液。在0℃以下保存,可应用30日。 (8)玻璃酸钾溶液 取玻璃酸钾贮备液1份,用磷酸盐缓冲液1份稀释。临用时制备。 标准品溶液的制备 精密称取玻璃酸酶标准品适量,加冷的水解明胶稀释液制成每1ml中含1.5单位的溶液。临用时制备。 供试品溶液的制备 按供试品的标示量或估计效价精密称取供试品适量,加冷的水解明胶稀释液制成每1ml中含约1.5单位的溶液。临用时制备。 标准曲线的制备 取大小相同的试管12支,按顺序加入标准品溶液0.00ml、0.10ml、0.20ml、0.30ml、0.40ml与0.50ml,各2支;再依次相应加入水解明胶稀释液0.50ml、0.40ml、0.30ml、0.20ml、0.10ml与0.00ml,每隔30秒顺序加入玻璃酸钾溶液0.50ml,使每一管的总体积为1.00ml,摇匀,置37℃±0.5℃水浴中;每管准确保温30分钟后,每间隔30秒钟顺序取出,立即顺序加入血清溶液4.0ml,摇匀,在室温放置30分钟,摇匀,在640nm的波长处测定吸光度;同时以磷酸盐缓冲液0.50ml代替玻璃酸钾溶液,加水解明胶稀释液0.50ml,摇匀,按上述方法自“置37℃±0.5℃的水浴中'起同法操作,作为空白。以吸光度为纵坐标,标准品溶液的效价(单位)为横坐标绘制标准曲线。 测定法 取大小相同的试管6支,依次加供试品溶液0.20ml、0.30ml与0.40ml,各2支;再依次相应加入水解明胶稀释液0.30ml、0.20ml与0.10ml,照标准曲线的制备项下,自“每隔30秒顺序加入玻璃酸钾溶液0.50ml”起,依法测定,自标准曲线上查得效价(单位)后,分别除以供试品的重量(mg),算出6份供试品的平均数,即为玻璃酸酶的效价(单位)。 |