本法系依据类毒素与相应抗毒素在适当的含量、比例、温度、反应时间等条件下,可在试管中发生抗原抗体结合,产生肉眼可见的絮状凝集反应。根据抗毒素絮状反应标准品可测定供试品的絮状单位值。 试剂 硼酸盐缓冲液 称取四硼酸钠(Na2B4O7?10H2O)0.5g、硼酸4.5g、氯化钠8.5g,加水溶解并稀释至1000ml。pH值为7.0~7.2。 标准品溶液的制备 精密量取白喉或破伤风抗毒素絮状反应国家标准品,用硼酸盐缓冲液准确稀释至每1ml含100Lf的溶液。 供试品溶液的制备 取供试品适量,加硼酸盐缓冲液稀释至适宜絮状单位。 测定法 精密量取每1ml含100Lf的抗毒素絮状反应标准品溶液0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml,分别加入絮状反应管,精密量取供试品溶液1ml,快速准确加入上述各絮状反应管内,摇匀,置45~50℃水浴中,连续观察,并记录絮状出现次序和时间。再取5支絮状反应管,重复上述试验,将最先出现絮状之管放中间,前后各加两管不同量抗毒素絮状反应标准品溶液,每管间隔0.05ml,再向各管中加入供试品1ml,观察絮状出现情况。根据结果,再重复试验1次,将最先出现絮状之管放中间,前后各加两管不同量抗毒素絮状反应标准品溶液,每管间隔0.02ml,同上法观察并记录结果,以2~3次相同值为最终测定值。 按下式计算∶ 供试品絮状单位(Lf/ml)=V×n×100 式中 V为最先出现絮状时使用的每1ml含100Lf的抗毒素絮状反应标准品溶液的体积,ml; n为供试品稀释倍数。 |