本通则适用于疫苗佐剂氢氧化铝(包括原位吸附疫苗的铝稀释剂)的质量控制。 1.基本要求 生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。 2.制备 可釆用以下两种方式制备，制备工艺应经批准。制备过程中，应控制反应温度、氢氧化钠(NaOH)溶液或氨水加入速度、搅拌速度、反应终点pH值等，以保证制得的氢氧化铝佐剂的理化性状稳定一致。 (1)氢氧化钠法 釆用铝盐(三氯化铝或硫酸铝钾)加氢氧化钠制备［AlCl3+3NaOH?Al(OH)3↓+3NaCl］或［2KAl(SO4)2+6NaOH?2Al(OH)3↓+3Na2SO4+K2SO4］。 (2)氨水法 采用铝盐(三氯化铝或硫酸铝钾)加氨水制备［AlCl3+3NH3?H2O?A1(OH)3↓+3NH4CI］或［2KAl(SO4)2+6NH3?H2O?2Al(OH)3↓+3(NH4)2SO4+K2SO4］，经透析去除氨根离子后制得。 以上方法制备的氢氧化铝可采用适宜的方法洗涤，以全程无菌操作或经高压灭菌或其他灭菌方式处理后保存备用。氢氧化铝经多次高压灭菌可能影响其对抗原的吸附效果，使用时应充分评估。 3.检定 (1)外观 振摇后应为浅蓝色或乳白色的胶体悬液，无摇不散的凝块及异物。 (2)溶解性 取供试品1ml，加浓硫酸1ml，经沸水浴15分钟，溶液应澄清；取供试品1ml，加20%~40%氢氧化钠溶液1ml，经沸水浴15分钟，溶液应澄清。 (3)鉴别试验 按以下操作进行，应显示铝盐鉴别反应。 供试品溶液制备：取供试品适量(使加入的铝含量约为10mg)，加入4ml浓盐酸，60℃水浴加热1小时，冷却，用水稀释至50ml；若外观浑浊，再经澄清过滤即得供试品溶液。 硫代乙酰胺试剂配制：量取水5ml，1mol/L氢氧化钠溶液15ml以及85%的甘油20ml，混合均匀。量取1ml上述混合液，加入40g/L硫代乙酰胺溶液0.2ml。98~100℃水浴加热20秒。临用前配制。 测定法：取供试品溶液10ml，加入73g/L稀盐酸溶液约0.5ml以及硫代乙酰胺试剂约0.5ml，应不产生沉淀。逐滴加入8.5%氢氧化钠溶液5ml，静置1小时，应产生凝胶状的白色沉淀。再加入8.5%氢氧化钠溶液5ml沉淀应溶解。逐滴加入107g/L氯化铵溶液5ml并静置30分钟，凝胶状的白色沉淀再次生成。 (4)pH值 依法检查(通则0631)，应符合批准的要求。 (5)铝含量 依法检查(通则3106)或釆用其他适宜方法检查，应符合批准的要求。 (6)吸附率 以氢氧化铝对牛血清白蛋白的吸附作用计算吸附率。 供试品溶液制备：取供试品适量，用0.85%~0.90%氯化钠溶液稀释至铝含量为1mg/ml，调节pH值至6.0~7.0，即为供试品溶液。同一种铝佐剂不同批次的pH值应调节为固定值，以保证不同批次检测的批间一致性。 牛血清白蛋白（简称牛白）溶液：取牛血清白蛋白适量，用0.85%～0.90%氯化钠溶液配制成10mg/ml溶液，调节pH值与供试品溶液pH值一致。 测定法：取15ml离心管5支，分别加牛血清白蛋白溶液（10mg/ml）0.08ml、0.16ml、0.4ml、0.8ml、1.2ml，并补0.85%~0.90%氯化钠溶液至4.0ml，混匀后，每管分别加入供试品溶液1.0ml，混匀，使各管牛血清白蛋白量分别为0.8mg、1.6mg、4mg、8mg、12mg，各管含铝为1mg。 将上述各管室温放置1小时（期间每隔10分钟用力振摇1次）后，5000g离心10分钟，收集上清液，采用Lowry法（通则0731第二法）或其他适宜方法测定各管上清液中游离牛血清白蛋白含量，记录各管吸光度值并计算蛋白质含量，以各管上清液游离的牛血清白蛋白含量对应其牛血清白蛋白总量计算各管吸附率（A）。上清液体积按5ml计算。 结果判定：牛白含量为0.8mg、1.6mg的2管上清蛋白质应为未检出，即吸附率应不低于90%；且牛白含量为4mg、8mg、12mg各管吸光度值应呈总体递增趋势（如吸光度值无法判定，需通过检测上清蛋白质含量判定其总体递增趋势），吸附率判为合格。 如供试品铝含量低于1mg/ml，可按适当比例调整上述各管铝含量和牛白含量后进行。结果判定以每1mg铝吸附1.6mg牛白的吸附率应不低于90%（即上清蛋白质未检出），且每1mg铝与更高浓度牛白吸附时，随牛白含量的递增各管吸光度值应呈总体递增趋势（如吸光度值无法判定，需通过检测上清蛋白质含量判定其呈总体递增趋势），吸附率判为合格。 （7）沉降率 用稀盐酸或氢氧化钠溶液将供试品pH值调至6.0~7.0，用水将供试品稀释至含铝5mg/ml，如供试品铝含量低于5mg/ml，调整pH后用9g/L的氯化钠溶液稀释至1mg/ml。如供试品铝含量低于1mg/ml，静置适宜时间，吸弃上清液使铝含量至1mg/ml。振摇至少30秒，取25ml溶液至量筒或刻度比色管，静置24小时，根据析出的上清液量，按照下列公式计算供试品的沉降率。 供试品溶液的铝含量会显著影响静置后析出的上清液量，应根据铝佐剂生产工艺选择适宜铝含量进行测定。沉降率应符合批准的要求。 （8）氯化钠含量或氯化物检测 ①氯化钠含量 无洗涤工艺的三氯化铝加氢氧化钠法制备的氢氧化铝应检测氯化钠含量。依法检查（通则3107），应符合批准的要求。 ②氯化物检测 有洗涤工艺的三氯化铝加氨水法制备的氢氧化铝应检测氯化物。 供试品溶液制备：取供试品0.5g，加入稀硝酸溶液（20→100）10ml中，用水稀释至500ml即为供试品溶液。 对照溶液（0.005mg/ml）制备：取0.1mg/ml氯标准溶液2.5ml至50ml量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。临用前配制。 取供试品溶液15ml，加入12.5%稀硝酸1ml，混匀，另取1支试管加入0.1mol/L硝酸银滴定液（1.7→100）1ml，将供试品溶液管的混合物倾入硝酸银滴定液管中混匀。 取对照溶液10ml，加入5ml水，与供试品管同法操作。 将以上反应管于避光处静置5分钟后，在黑色背景下观察各管浊度。供试品管的浊度不得比对照溶液管更浓。即供试品的氯化物含量应不高于0.33%。 （9）硫酸盐 取供试品0.25g，加9.5~10.5g/L盐酸1ml，加热溶解后，放冷，用水稀释至50ml过滤。取滤液20ml，依法检查（通则0802），与标准硫酸钾溶液（SO42-100μg/ml）5.0ml制成的对照溶液比较，应不高于0.5%。 （10）硝酸盐 精密量取0.1mg/ml标准硝酸盐（NO3-）溶液5ml，置50ml纳氏比色管甲中。取供试品5g置50ml纳氏比色管乙中。甲、乙两管分别于冰浴中冷却，加10%氯化钾溶液（10→100）0.4ml与0.1%二苯胺硫酸溶液（0.1→100）0.1ml，摇匀，缓缓滴加浓硫酸5ml，摇匀，将比色管于50℃水浴中放置15分钟，取出比较颜色。乙管颜色不得深于甲管，即供试品硝酸盐含量应不高于0.01%。 （11）铵盐 碱性碘化汞钾试液制备：取碘化钾10g，加水10ml溶解后，缓缓加入二氯化汞的饱和水溶液，随加随搅拌，至生成的红色沉淀不再溶解，加氢氧化钾30g，溶解后，再加二氯化汞的饱和水溶液1ml或1ml以上，补加纯化水至200ml，静置，使沉淀，即得。倾取上层的澄清液使用。 精密量取0.1mg/ml标准胺（NH4+）溶液0.5ml置50ml纳氏比色管甲中，加水9.5ml。取供试品1.0g置50ml纳氏比色管乙中，加水至10ml甲、乙两管分别加碱性碘化汞钾试液2ml，放置15分钟后观察。乙管颜色不得深于甲管，即供试品铵离子含量应不高于0.005%。 也可采用其他适宜方法检查。 （12）砷盐 取供试品2.0g，加9.5%~10.5%硫酸10ml，煮沸，冷却后，加入浓盐酸5ml，补加水至28ml，依法检查（通则0822第一法），应不高于0.0001%。 （13）铁盐 取供试品0.67g至纳氏比色管A中，加稀盐酸2ml，可水浴溶解，放冷至室温，用水稀释至10ml，量取0.002mg/ml铁对照品溶液5ml至纳氏比色管B中，加稀盐酸2ml，加水3ml。分别向纳氏比色管A、B中加入2ml200g/L柠檬酸溶液（20→100）和0.1ml巯基乙酸。向每个纳氏比色管中加入170~180g/L氨溶液（67→100），使溶液呈碱性（用试纸检验溶液是否呈碱性）。每个纳氏比色管中各加水至20ml。静置5分钟，观察溶液颜色。 A管溶液中的粉红色不得深于B管，即本品的铁盐含量应不高于0.0015%。 （14）重金属 pH3.5醋酸盐缓冲溶液制备：取醋酸铵25g溶于25ml水中，加入7mol/L盐酸38ml。用2mol/L盐酸溶液或2mol/L氨溶液调pH值至3.5，然后用水稀释至100ml，即得。 硫代乙酰胺试剂制备：量取氢氧化钠甘油混合溶液（量取15ml1mol/L氢氧化钠溶液，加纯化水5ml，甘油20ml，混合均匀）5ml，加入40g/L硫代乙酰胺溶液（称取1g硫代乙酰胺用水溶解并稀释至25ml。2~8℃可保存2个月）1ml，混匀，98~100℃水浴加热20秒。临用前配制。 对照溶液的制备：量取浓盐酸2ml于一蒸发皿中，至水浴上蒸发至干，加pH3.5醋酸盐缓冲溶液2ml，加水15ml，微温溶解后过滤，滤液收集于纳氏比色管甲中，加0.004mg/ml铅工作溶液5ml（量取0.1mg/ml铅标准溶液2ml至50ml量瓶中，用水稀释至刻度），补加纯化水至25ml。 供试品溶液的制备：取供试品1.0g于一蒸发皿中，加浓盐酸2ml，至水浴上蒸发至干，再加水2ml，搅拌均匀，继续蒸发至近干时，搅拌使成干燥的粉末，加pH3.5醋酸盐缓冲溶液2ml，加水10ml，微温溶解后过滤，滤液收集于纳氏比色管乙中，补加水至25ml。 对照管的制备：同供试品溶液制备，滤液收集于纳氏比色管丙中，补加水至20ml，加0.004mg/ml铅工作溶液5ml。 甲、乙、丙各管分别加入硫代乙酰胺试剂2ml，混合均匀，2分钟后置于白纸上，自上向下透视检查各管。 丙管中的显色不得浅于甲管。乙管中显出的颜色不得深于甲管，即供试品重金属含量应不高于0.002%。 （15）细菌内毒素检查 依法检查（通则1143），每1mg铝应小于5EU。 （16）无菌检查 依法检查（通则1101），应符合规定。 4，保存及有效期 2~30℃保存，不得冷冻。依据稳定性试验结果确定保存时间。 |
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