[意见反馈]返回搜索首页环球医药招商网 > 医药数据 > 《中国药典》2020年版

 

肝素生物测定法

    药品名称: 1208 肝素生物测定法
    版本: 2020年版
    来源: 四部
    分类: 通则
    内容:

    本法系用于肝素类产品的效价测定。测定方法分为抗Ⅱa因子/抗Ⅹa因子效价测定法和凝血时间测定法,凝血时间测定法又分为兔全血法、血浆复钙法、APTT法。

    抗Ⅱa因子/抗Ⅹa因子效价测定法

    本法系通过微量显色法比较肝素标准品与供试品抗Ⅱa因子和抗Xa因子的活性,以测定供试品的效价。

    抗Ⅱa因子测定法

    试剂 (1)三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液(pH8.4) 取三羟甲基氨基甲烷6.06g,氯化钠10.23g,乙二胺四醋酸二钠2.8g,聚乙二醇6000 1.0g,加水800ml使溶解,用盐酸调节pH值至8.4,用水稀释至1000ml。

    (2)抗凝血酶溶液 取抗凝血酶(ATⅢ),加三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液(pH8.4)溶解并稀释制成每lml中含抗凝血酶0.25IU的溶液。

    (3)凝血酶溶液 取凝血酶(FⅡa),加三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液(pH8.4)溶解并稀释制成每1ml中约含5IU的溶液。如实验中空白管(B1、B2)的吸光度值不在0.8~1.0范围内,则调整凝血酶溶液浓度使其达到该范围内。

    (4)发色底物溶液 取发色底物S-2238(或其他FⅡa特异性发色底物),加水制成0.003mol/L的溶液,临用前用水稀释至0.625mmol/L。

    标准品溶液与稀释液的制备 试验当日,取肝素标准品,复溶后制成标准品溶液。取标准品溶液适量,加三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液(pH8.4)分别稀释制成4个不同浓度的溶液。该浓度应在log剂量-反应的线性范围内,一般为每1ml中含0.0085~0.035IU,相邻两浓度之比值(r)应相同。

    供试品溶液与稀释液的制备 除另有规定外,按供试品的标示量或估计效价(AT),用三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液(pH8.4),照标准品溶液与稀释液的制备法制成4个不同浓度的溶液,相邻两浓度之比值(r)应与标准品相等,供试品与标准品各剂量组的反应值应相近。

    测定法 取不同浓度的标准品(S)系列溶液或供试品(T)系列溶液及上述缓冲液(B),按B1、S1、S2、S3、S4、T1、T2、T3、T4、T1、T2、T3、T4、S1、S2、S3、S4、B2的顺序依次向各小管中分别精密加入20~100μl相同体积(V)的上述溶液;每管精密加入相同体积(V)的抗凝血酶溶液,混匀,37℃平衡2分钟;再精密加入凝血酶溶液适量(2V),混匀,37℃平衡2分钟;再精密加入发色底物溶液适量(2V),混匀,37℃准确保温2分钟后,再精密加入50%醋酸溶液适量(2V)终止反应后,迅速冷却至室温。用适宜设备在405nm的波长处测定各管吸光度。B1、B2两管的吸光度不得有显著性差异。以吸光度为纵坐标,标准品系列溶液(或供试品系列溶液)浓度的对数值为横坐标分别作线性回归,按生物检定统计法(通则1431)中的量反应平行线原理4.4法实验设计,计算效价及实验误差。

    本法的可信限率(FL%)不得大于10%。

    抗Ⅹa因子测定法

    试剂 (1)三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液(pH8.4) 照抗Ⅱa因子项下配制。

    (2)抗凝血酶溶液 取抗凝血酶(ATⅢ),加三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液(pH8.4)溶解并稀释制成每1ml中含抗凝血酶1IU的溶液。

    (3)Ⅹa因子溶液 取Ⅹa因子(FⅩa),加三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液(pH8.4)溶解并稀释制成每1ml中约含0.4IU(或7.lnkat)的溶液。如实验中空白管(B1、B2)的吸光度值不在0.8~1.0范围内,则调整Ⅹa因子溶液浓度使其达到该范围内。

    (4)发色底物溶液 取发色底物S-2765(或其他FⅩa特异性发色底物),加水制成0.003mol/L的溶液,临用前用水稀释至1mmol/L。

    标准品溶液与稀释液的制备 试验当日,取肝素标准品,复溶后制成标准品溶液。取标准品溶液适量,加三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液(pH8.4)分别稀释制成4个不同浓度的溶液。该浓度应在log剂量-反应的线性范围内,一般为每1ml中含0.035~0.15IU,相邻两浓度之比值(r)应相同。

    供试品溶液与稀释液的制备 除另有规定外,按供试品的标示量或估计效价(AT),照标准品溶液与稀释液的制备法制成4个不同浓度的溶液,相邻两浓度之比值(r)应与标准品相等,供试品与标准品各剂量组的反应值应相近。

    测定法 取不同浓度的标准品(S)系列溶液或供试品(T)系列溶液及上述缓冲液(B),按B1、S1、S2、S3、S4、T1、T2、T3、T4、T1、T2、T3、T4、S1、S2、S3、S4、B2的顺序依次向各小管中分别精密加入20~100μl相同体积(V)的上述溶液;每管精密加入相同体积(V)的抗凝血酶溶液,混匀,37℃平衡2分钟;再精密加入Xa因子溶液适量(2V),混匀,37℃平衡2分钟;再精密加入发色底物溶液适量(2V),混匀,37℃准确保温2分钟后,再各精密加入50%醋酸溶液适量(2V)终止反应后,迅速冷却至室温。用适宜设备在405nm的波长处测定各管吸光度。B1、B2两管的吸光度不得有显著性差异。以吸光度为纵坐标,标准品系列溶液(或供试品系列溶液)浓度的对数值为横坐标分别作线性回归,按生物检定统计法(通则1431)中的量反应平行线原理4.4法实验设计,计算效价及实验误差。

    本法的可信限率(FL%)不得大于10%。

    凝血时间测定法

    本法系比较肝素标准品(S)与供试品(T)延长新鲜兔血或兔、猪血浆凝结时间的作用,以测定供试品的效价。

    标准品溶液的制备 精密称取肝素标准品适量,按标示效价加灭菌注射用水溶解使成每1ml中含100单位的溶液,分装于适宜的容器内,4~8℃贮存,经验证保持活性符合要求的条件下,可在3个月内使用。

    标准品稀释液的制备 试验当日,精密量取标准品溶液,按高、中、低剂量组(dS3、dS2、dS1)用氯化钠注射液配制成3种浓度的稀释液,相邻两浓度的比值(r)应相等;调节剂量使低剂量组各管的平均凝结时间较不加肝素对照管明显延长,一般以大于1.5倍空白血浆的凝结时间为宜。高剂量组各管的平均凝结时间,用兔全血法者,以不超过60分钟为宜,其稀释液一般可制成每1ml中含肝素2~5单位,r为1∶0.7左右;用血浆复钙法者,以不超过30分钟为宜,其稀释液一般可制成每1ml中含肝素0.5~1.5单位,r为1∶0.85左右;用活化部分凝血活酶时间测定法(APTT法)者,一般以不超过90秒为宜,其稀释液浓度一般可制成每1ml含肝素0.4~1.7单位,r为1∶0.85左右,可根据实验情况调整。

    供试品溶液与稀释液的制备 按供试品的标示量或估计效价(AT),照标准品溶液与稀释液的制备法制成高、中、低(dT3、dT2、dT1)3种浓度的稀释液。相邻两浓度之比值(r)应与标准品相等,供试品与标准品各剂量组的凝结时间应相近。

    血浆的制备 迅速收集兔或猪血置预先放有109mmol/L枸椽酸钠溶液的容器中,枸椽酸钠溶液与血液容积比为1∶9,边收集边轻轻振摇,混匀,室温下1500×g离心不少于15分钟(g为重力常数)。立即吸出血浆,并分成若干份分装于适宜容器内,低温冻结贮存。临用时置37℃±0.5℃水浴中融化,用两层纱布或快速滤纸过滤,使用过程中在4~8℃放置。血浆复钙法可使用兔或猪血浆;APTT法使用兔血浆。

    测定法

    兔全血法 取管径均匀(0.8cm×3.8cm或1.0cm×7.5cm)、清洁干燥的小试管若干支,每管加入一种浓度的标准品或供试品稀释液0.lml,每种浓度不得少于3管,各浓度的试管支数相等。取刚抽出的兔血适量,分别注入小试管内,每管0.9ml,立即混匀,避免产生气泡,并开始计算时间。将小试管置37℃±0.5℃恒温水浴中,从动物釆血时起至小试管放入恒温水浴的时间不得超过3分钟,注意观察并记录各管的凝结时间。

    本法的可信限率(FL%)不得大于10%。

    血浆复钙法 取上述规格的小试管若干支,分别加入血浆一定量,置37℃±0.5℃恒温水浴中5~10分钟后,依次每管加入一种浓度的标准品或供试品稀释液及1%氯化钙溶液,每种浓度不得少于3管,各浓度的试管支数相等,血浆、肝素稀释液和氯化钙溶液的加入量分别为0.5ml、0.4ml和0.1ml,或0.8ml、0.1ml和0.1ml,加入1%氯化钙溶液后,立即混匀,避免产生气泡,并开始计算时间,注意观察并记录各管凝结时间。

    本法的可信限率(FL%)不得大于5%。

    APTT法 取凝血分析仪样品杯若干,每管依次加入血浆50μl、一种浓度的标准品或供试品稀释液50μl、APTT试剂50μl,混匀,应避免产生气泡。37℃±0.5℃预温180秒后,每管再加入CaCl2试剂50μl,然后立即用凝血分析仪测定凝结时间,即活化部分凝血活酶时间(APTT)。标准品或供试品稀释液每个浓度的测定次数不得少于3次,各浓度的测定次数应相同。测定时,血浆、标准品或供试品稀释液、APTT试剂、CaCl2试剂的加入比例和预温时间可根据仪器或试剂的说明书适当调整。测定顺序以保证标准品和供试品测定的平行性为原则,应尽量保证相同浓度的标准品和供试品稀释液的测定时间接近。

    将上述方法测得的凝结时间换算成对数,照生物检定统计法(通则1431)中的量反应平行线测定法计算效价及实验误差。

    本法的可信限率(FL%)不得大于10%。

招商信息

其它药品推荐

相关资讯

    药审中心工作人员公开招聘公告
    因工作需要,按照《国家食品药品监督管理总局直属事业单位公开招聘工作管理办法》(试行)等相关规定,现将公开招聘工作人员有关事项予以公告一应聘人员基本条件(一)具有中华人民共和国国籍;(二)政治素质高,思想品德好,遵纪守法,具有良好的社会公德职业道德和个人品行;(三)工作态度积极,爱岗敬业,事业心责任感强,具有良好的团队协作和开拓创新精神;(四)具有岗位所需的学历学位专业知识技能,所学专业与所从事工作对口或相近,具有良好的计算机应用能力;(五)具有较好的文字功底语言表达和沟通能力,能够熟练运用英语进
    2016/1/19 13:57:01

    药审中心工作人员公开招聘公告

    沈阳市近两成膨化食品含禁用添加剂
    中国食品质量报讯孙明鑫沈阳市质量技术监督局近日对沈阳市所属辖区内的膨化食品生产企业进行了产品质量监督抽查。此次共抽查家企业生产的批次膨化产品,合格批次,不合格批次,合格率,这些不合格产品几乎均检出了明令禁止使用的糖精钠和甜蜜素。据介绍,《食品添加剂使用卫生标准》中明确规定,膨化食品中不得使用糖精钠和甜蜜素。而本次抽检中,有批次产品检出糖精钠批次产品检出甜蜜素。
    2010/8/26 17:10:40

    沈阳市近两成膨化食品含禁用添加剂

    我国医疗器械产业在农村市场存在的弊端
    宋体宋体长期以来,由于我国农村地区没有建立和健全完善的基层医疗诊疗机构,因此医疗器械产业在农村根本得不到有效的释放,宋体中投顾问医药行业研究员宋体郭凡礼指出,这也导致我国农村地区医疗器械简单安全隐患大,给农村地区的人们生命健康留下不小的隐患。宋体中投顾问医药行业研究员宋体郭凡礼指出,农村市场区别于城市的医疗机构,其受到资金医疗技术以及消费群体等多种因素的制约,而农村医疗机构中使用的医疗器械大多都处于举步维艰的状态,这主要有几点因素阻碍了医疗器械在我国广大的农村市场的使用。宋体郭凡礼指出,由于宋体
    2009/9/23 18:43:39

    我国医疗器械产业在农村市场存在的弊端

    政策严控 步长制药转向新市场销售数据升了
    辅助用药限制重点监控等使用的政策风暴下,其间的相关药企究竟是在被重创还是安然无恙政策严控,销售却升了昨日(日),步长制药发布公告,公开了系列核心产品的销售数据和利润情况。这一举动是为了回应此前市场的猜测和担心。此前,有文章猜测步长制药的发展依赖于辅助用药的政策红利,尤其是中药注射剂丹红注射液注射液为其带来了丰厚的利润。然而,随着医保控费,中药注射剂被严格监控,步长制药或将遭到冲击。针对这一疑问,步长在昨日的公告中公开了包括丹红注射液()等产品的和年的销售数据和变化情况(下图),公告数据显示“公司
    2018/6/28 11:05:20

    政策严控 步长制药转向新市场销售数据升了

    福建省食品药品监管局严格日常监管 全面推进法治建设
    近日,福建省食品药品监督管理局连续召开党组中心组会议党组扩大会议全局干部会议,认真传达贯彻全国食品安全办主任座谈会暨食品药品监管法制工作会议精神,并就贯彻落实会议精神提出四点意见。一掀起宣贯高潮一是组织开展学习贯彻活动,对从事食品安全执法人员进行全员培训考核。督促行业协会食品生产经营者检验机构认证机构开展法律培训。二是建立领导干部带头学法制度开展法制宣传,进一步落实地方政府负总责任。三是加强对干部队伍的法制教育,实现监管所需法律法规应知尽知熟练掌握。二严格日常监管一是突出重点。重点治理农村市场城
    2015/5/19 15:34:01

    福建省食品药品监管局严格日常监管 全面推进法治建设

    国家药监局关于金振颗粒、妇科白凤胶囊转换为非处方的公告(2021年第3号)
    根据《处方药与非处方药分类管理办法(试行)》(原国家药品监督管理局令第号)的规定,经国家药品监督管理局组织论证和审定,金振颗粒妇科白凤胶囊胶囊由处方药转化为非处方药。品种名单(附件)及非处方药处方药说明书范本(附件)一并发布。请相关药品上市许可持有人在年月日前,依据《药品注册管理办法》等有关规定将修订的药品说明书报省级药品监督管理部门备案,并将说明书修订的内容及时通知相关医疗机构药品经营企业等单位。非处方药说明书范本规定内容之外的说明书其他内容按原批准证明文件执行。药品标签涉及相关内容的,应当一
    2021/1/12 9:16:20

    国家药监局关于金振颗粒、妇科白凤胶囊转换为非处方的公告(2021年第3号)

环球医药网成立于2003年,专业提供医药招商、医药代理、信息资讯、品牌展示、药品招商等多元化服务的中国医药招商网站平台
www.qgyyzs.net 版权所有 Copy Right 2003-2024 中华人民共和国增值电信业务经营许可证:浙B2-20090049
免责声明:环球医药网只起到信息平台作用,不为交易经过负任何责任,请双方谨慎交易,以确保您的权益。