培养基 胨 15g 0.1%硫酸亚铁(FeSO4?7H2O）溶液 0.5ml 氯化钠 4g 枸椽酸钠 5.88g 20%硫酸镁(MgSO4?7H2O）溶液 1ml 磷酸氢二钾 4g 甘油 50g 肉浸液 1000ml 混合上述成分，调节pH值使灭菌后为7.0～7.2，分装于500ml锥形瓶内，每瓶80ml，在115℃灭菌30分钟。 青霉素酶溶液的制备 取蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)〔CMCC(B)63 301〕的斜面培养物，接种至上述一瓶培养基内，在25℃摇床培养18小时后，取此培养物接种至其余各瓶培养基内，每瓶接种10ml，同时每瓶加入无菌青霉素4500单位，在25℃摇床培养24小时，再加无菌青霉素2万单位，继续培养24小时，再加无菌青霉素2万单位，继续培养24小时，离心沉淀菌体，调节pH值至约8.5，用滤柱滤过除菌，滤液用无菌操作调pH值至近中性后，分装于适宜容器内，在10℃以下贮存，备用： 酶活力测定 青霉素溶液的制备 称取青霉素钠(钾)适量，用磷酸盐缓冲液(pH7.0)溶解成每1ml中含青霉素1万单位的溶液。 青霉素酶稀释液的制备 取青霉素酶溶液，按估计单位用磷酸盐缓冲液(pH7.0)稀释成每1ml中约含青霉素酶8000～12 000单位的溶液，在37℃预热。 测定法 精密量取青霉素溶液50ml，置100ml量瓶中，预热至37℃后，精密加入已预热的青霉素酶稀释液25ml，迅速混匀，在37℃准确放置1小时，精密量取3ml，立即加至已精密量取的碘滴定液(0.005mol/L)［精密量取碘滴定液(0.05mol/L)10ml，置100ml量瓶中，用醋酸钠缓冲液(pH4.5)稀释至刻度］25ml中，在室温暗处放置15分钟，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失。 空白试验 取已预热的青霉素溶液2ml，在37℃放置1小时，精密加入上述碘滴定液(0.005mol/L)25ml，然后精密加青霉素酶稀释液1ml，在室温暗处放置15分钟，用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定。按下式计算： E=(B－A)×M×F×D×100 式中 E为青霉素酶活力，单位/(ml?h)； B为空白滴定所消耗的上述硫代硫酸钠滴定液的容量，ml； A 为供试品滴定所消耗的上述硫代硫酸钠滴定液的容量，ml； M 为硫代硫酸钠滴定液的浓度，mol/L； F 为在相同条件下，每1ml的上述碘滴定液(0.005mol/L)相当于青霉素的效价，单位； D 为青霉素酶溶液的稀释倍数。 【附注】磷酸盐缓冲液(pH7.0) 取磷酸氢二钾7.36g与磷酸二氢钾3.14g，加水使成l000mL 醋酸钠缓冲液(pH4.5) 取冰醋酸13.86ml，加水使成250ml；另取结晶醋酸钠27.30g，加水使成200ml，两液混合均匀。 |
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