本法系在琼脂糖凝胶板上按一定距离打数个小孔,在相邻的两孔内分别加入抗原与抗体,若抗原、抗体互相对应,浓度、比例适当,则一定时间后,在抗原与抗体孔之间形成免疫复合物的沉淀线,以此对供试品的特异性进行检查。 供试品溶液的制备 用0.85%~0.90%氯化钠溶液将供试品的蛋白质浓度稀释至适当浓度。 试剂 (1)0.5%氨基黑染色剂 称取氨基黑10B 0.5g,加甲醇50ml、冰醋酸10ml与水40ml的混合液,溶解,即得。 (2)脱色液 量取乙醇45ml、冰醋酸5ml与水50ml混合均匀,即得。 检查法 将完全溶胀的1.5%琼脂糖溶液倾倒于水平玻板上(每平方厘米加0.19ml琼脂糖),凝固后,按下图打孔,直径3mm,孔距3mm(方阵型)。根据需要确定方阵型图数量。中央孔加入抗血清,周边孔加入供试品溶液,并留1孔加入相应阳性对照血清。每孔加样20μl,然后置水平湿盒中,37℃水平扩散24小时。用0.85%~0.90%氯化钠溶液充分浸泡琼脂糖凝胶板,以除去未结合蛋白质。将浸泡好的琼脂糖凝胶板放入0.5%氨基黑溶液中染色。用脱色液脱色至背景无色,沉淀线呈清晰蓝色为止。用适当方法保存或复制图谱。 结果判定 各阳性对照出现相应的沉淀线则试验成立,供试品与人血清(血浆)抗体之间应出现相应沉淀线,表示两者具有同源性。 |