【处方】龟甲60g 鹿角240g 楮实子75g 枸杞子45g 人参22.5g 茯苓20g 【制法】以上六味，龟甲、鹿角加水煎煮二次，每次12小时，合并煎液，滤过，滤液备用。其余楮实子等四味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述滤液合并，浓缩至相对密度为1.24-1.26（80℃）的稠膏，加适量糖粉，制成颗粒，干燥，制成1000g，即得。 【性状】本品为浅棕黄色的颗粒；味甜。 【鉴别】（1）取本品10g，加水70ml，加热回流30分钟，放冷，离心，取上清液，用乙酸乙酯30ml振摇提取，提取液浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（3∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 （2）取本品40g，加三氯甲烷100ml，加热回流1小时，放冷，离心，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水饱和正丁醇40ml，超声处理30分钟，放冷，离心，上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液回收溶剂至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参对照药材1g，加三氯甲烷40ml，同法制成对照药材溶液。再取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液20μl，对照药材溶液及对照品溶液各1～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上，分别显相同颜色的斑点或荧光斑点。 （3）取本品40g，加乙醇100ml，超声处理30分钟，离心，取上清液，蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取茯苓对照药材1g，加乙醇50ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液20μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙醚（3∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 （4）取本品10g，加1%碳酸氢铵溶液50ml，超声处理30分钟，用滤纸滤过，再用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液100μl，置微量进样瓶中，加胰蛋白酶10μl（取序列分析用胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml中含1mg的溶液，临用时配制），摇匀，37℃恒温酶解12小时，作为供试品溶液。另取龟甲胶对照药材、鹿角胶对照药材各0.1g，加1%碳酸氢铵溶液50ml，超声处理30分钟，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，同法制成对照药材溶液。照高效液相色谱-质谱法（通则0512或通则0431）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径为2.1μm）；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.3ml。釆用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+），进行多反应监测（MRM），选择质荷比（m/z）631.3（双电荷）746.4和631.3（双电荷）→921.4作为龟甲检测离子对，选择质荷比（m/z）765.4（双电荷）→554.0和765.4（双电荷）→733.0作为鹿角检测离子对。取龟甲胶对照药材溶液、鹿角胶对照药材溶液，进样5μl，按上述检测离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于3∶1。 吸取供试品溶液5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定。以质荷比（m/z）631.3（双电荷）→546.4和631.3（双电荷）→921.4离子对提取的供试品离子流图中，应同时呈现与龟甲胶对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。以质荷比（m/z）765.4（双电荷）→554.0和765.4（双电荷）→733.0离子对提取的供试品离子流图中，呈现出与鹿角胶对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。 【检查】应符合颗粒剂项下有关的各项规定（通则0104）。 【含量测定】照高效液相色谱法（通则0512）测定。 色谱条件与系统适用性试验 以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.06mol/L醋酸钠溶液（用冰醋酸调pH6.40）-乙腈（200∶30）为流动相A，以乙腈-水（50∶50）为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为360nm。理论板数按L-羟脯氨酸峰计算应不低于5000。 对照品溶液的制备 取门冬氨酸对照品、谷氨酸对照品、L-羟辅氨酸对照品、丝氨酸对照品、甘氨酸对照品、苏氨酸对照品、脯氨酸对照品、丙氨酸对照品、缬氨酸对照品、异亮氨酸对照品、亮氨酸对照品、苯丙氨酸对照品和盐酸赖氨酸对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml分别含门冬氨酸、谷氨酸、L-羟脯氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸40μg，含苏氨酸、丝氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、盐酸赖氨酸10μg的混合溶液，即得。（赖氨酸重量=盐酸赖氨酸/1.25） 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1ml、2ml、4ml、8ml、15ml，分别加0.1mol/L盐酸溶液至25ml。分别精密量取1ml，置10ml棕色量瓶中，各加0.5mol/L碳酸钠缓冲液（以0.5mol/L碳酸钠调0.5mol/L碳酸氢钠至pH9.0）1.0ml和1%2，4-二硝基氟苯的乙腈溶液1.0ml，摇匀，60℃水浴暗处放置60分钟。取出，冷却后，加入0.02mol/L醋酸铵溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。取0.1mol/L盐酸溶液1ml，同法制备空白溶液。精密吸取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，扣除试剂峰。以各对照品浓度为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线。 供试品溶液的制备 取本品，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.1mol/L盐酸溶液25ml，超声处理（功率50W，频率40kHz）30分钟，放至室温，滤过。精密量取滤液2ml，加入盐酸2ml，105℃放置24小时。取出冷却后，转移至25ml量瓶中，加入6mol/L氢氧化钠溶液4ml，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度。摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml棕色量瓶中”起，同法操作，即得。 测定法 精密吸取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，从标准曲线上读出供试品中相当于各氨基酸的量，计算，即得。 本品每1g含门冬氨酸（C4H7NO4）、谷氨酸（C5H9NO4）、L-羟脯氨酸（C5H9NO3）、甘氨酸（C2H5NO2）、脯氨酸（C5H9NO2）、丙氨酸（C3H7NO2）、苏氨酸（C4H9NO3）、丝氨酸（C3H7NO3）、缬氨酸（C5H11NO2）、异亮氨酸（C6H13NO2）、亮氨酸（C6H13NO2）、苯丙氨酸（C9H11NO2）、赖氨酸（C9H14N2O2）的总量不得少于18.0mg。 【功能与主治】补气养血，填精益髓。用于健忘症，精神衰弱，腰膝酸软，神疲乏力。 【用法与用量】开水冲服。一次20g，一日2次。 【规格】每袋装20g 【贮藏】密封。 |
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