本品系自牛胰或牛肺中提取、纯化制得的具有抑制蛋白水解酶活性的多肽。按无水物计算，每1mg抑肽酶的活力不得少于3.0单位。 【制法要求】本品应从检疫合格的牛胰或肺中提取，生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求。本品为动物来源，工艺中应进行病毒的安全性控制。 【性状】本品为白色至微黄色粉末。 本品在水或0.9%氯化钠溶液中易溶，在乙醇、丙酮或乙醚中不溶。 【鉴别】（1）取本品与胰蛋白酶，分别加水溶解并稀释制成每1ml中含1mg的溶液，各取10μl置点滴板上，混匀后，加对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐试液0.2ml，放置数分钟后，应不显紫红色。以胰蛋白酶溶液10μl作对照，同法操作，应显紫红色。 （2）在N-焦谷氨酰-抑肽酶和有关物质项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。 【检查】吸光度 取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中含3.0单位的溶液，照紫外-可见分光光度法（通则0401）测定，在277nm的波长处有最大吸收，吸光度不得过0.8。 酸度 取本品，加水溶解并稀释制成每1ml中含5mg的溶液，依法测定（通则0631），pH值应为5.0～7.0。 溶液的澄清度 取本品，加水溶解并稀释制成每1ml中含2mg的溶液，依法检查（通则0902第一法），溶液应澄清。 高分子蛋白质 照分子排阻色谱法（通则0514）测定。 供试品溶液 取本品，加水溶解并定量稀释制成每1ml中含5单位的溶液。 系统适用性溶液 取经112℃加热2小时处理过的抑肽酶适量，加水溶解并稀释制成每1ml中含5单位的溶液。 色谱条件 以亲水的改性硅胶为填充剂（TSKgel G4000SWXL柱，7.8mmX300mm，8μm或其他适宜的色谱柱），用3根色谱柱串联；以3mol/L醋酸溶液为流动相；流速为每分钟1.0ml；检测波长为280nm；柱温为35℃;进样体积100μl。 系统适用性要求 系统适用性溶液色谱图中，二聚体峰相对抑肽酶峰的保留时间约为0.9；二聚体峰与抑肽酶峰间的分离度应大于1.0；抑肽酶主峰的拖尾因子不得大于2.5。 测定法 精密量取供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。 限度 供试品溶液色谱图中，保留时间小于抑肽酶主峰的均为高分子蛋白质峰，按峰面积归一化法计算，高分子蛋白质的总量不得大于1.0%。 去丙氨酸-去甘氨酸抑肽酶和去丙氨酸-抑肽酶 照毛细管电泳法（通则0542）测定。 供试品溶液 取本品适量，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含5单位的溶液。 对照品溶液 取抑肽酶对照品，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含5单位的溶液。 电泳条件 用熔融石英毛细管为分离柱（75μmX600mm，有效长度500mm）；以120mmol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH 2.5）为操作缓冲液；检测波长为214nm；毛细管温度为30℃；操作电压为12kV。进样端为正极，1.5kPa压力进样，进样时间为3秒。每次进样前，依次用0.1mol/L氢氧化钠溶液、去离子水和操作缓冲液清洗毛细管柱2、2和5分钟。 系统适用性要求 对照品溶液电泳图中，去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶峰相对抑肽酶峰的迁移时间为0.98，去丙氨酸-抑肽酶峰相对抑肽酶峰的迁移时间为0.99；去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶峰与去丙氨酸-抑肽酶峰间的分离度应大于0.8，去丙氨酸-抑肽酶峰与抑肽酶峰间的分离度应大于0.5。抑肽酶峰的拖尾因子不得大于3。 测定法 取供试品溶液进样，记录电泳图。 限度 按公式100（ri/rs）计算，其中ri为去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶或去丙氨酸-抑肽酶的校正峰面积（峰面积/迁移时间），rs为去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶、去丙氨酸-抑肽酶与抑肽酶的校正峰面积总和。去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶的量不得大于8.0%，去丙氨酸-抑肽酶的量不得大于7.5%。 N-焦谷氨酰-抑肽酶和有关物质 照高效液相色谱法（通则0512）测定。 供试品溶液 取本品适量，加流动相A溶解并稀释制成每1ml中约含5单位的溶液。 对照品溶液 取抑肽酶对照品，加流动相A溶解并稀释制成每1ml中约含5单位的溶液。 色谱条件 用阳离子色谱柱（TSK-GEL IC-Cation-SW柱，7.8mmX750mm，10μm或其他适宜的色谱柱）；以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾3.52g、磷酸氢二钠7.26g，加水1000ml使溶解）为流动相A，以磷酸盐-硫酸铵缓冲液（取磷酸二氢钾3.52g、磷酸氢二钠7.26g、硫酸铵66.07g，加水1000ml使溶解）为流动相B，按下表进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；检测波长为210nm；柱温为40℃;进样体积40μl。 时间（分钟） 流动相A（%） 流动相B（%） 0 72 28 21 30 70 30 0 100 31 72 28 40 72 28 系统适用性要求 对照品溶液色谱图中，抑肽酶峰的保留时间为17～20分钟；N-焦谷氨酰-抑肽酶峰相对抑肽酶峰的保留时间为0.9；N-焦谷氨酰-抑肽酶峰与抑肽酶峰间的分离度应大于1.0；抑肽酶峰的拖尾因子应大于2.0。 测定法 精密量取供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。 限度 按峰面积归一化法计算，N-焦谷氨酰-抑肽酶的峰面积不得大于1.0%；单个未知杂质的峰面积不得大于0.5%，未知杂质峰面积的和不得大于1.0%。 水分 取本品，照水分测定法（通则0832第一法1）测定，含水分不得过6.0%。 热原 取本品，加灭菌注射用水溶解并稀释制成每1ml中含15单位的溶液，依法检查（通则1142），剂量按家兔体重每1kg注射1ml，应符合规定。 异常毒性 取本品，加氯化钠注射液溶解并稀释制成每1ml中含4单位的溶液，依法检查（通则1141），应符合规定。 降压物质 取本品，加氯化钠注射液溶解并稀释，依法检查（通则1145），剂量按猫体重每1kg注射1.5单位，应符合规定。 【效价测定】底物溶液 取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐171.3mg，加水溶解并稀释至25ml。临用新制。 胰蛋白酶溶液 取胰蛋白酶对照品适量，精密称定，加盐酸滴定液（0.001mol/L）溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.8单位（每1ml中约含1mg）的溶液，临用新制并置冰浴中。 胰蛋白酶稀释液 精密量取胰蛋白酶溶液1ml，置20ml量瓶中，用硼砂-氯化钙缓冲液（pH 8.0）稀释至刻度，摇匀，放置10分钟，置冰浴中。 供试品溶液 取本品适量，精密称定，加硼砂-氯化钙缓冲液（pH 8.0）溶解并定量稀释制成每1ml中约含1.67单位（每1ml中约含0.6mg）的溶液，精密量取0.5ml与胰蛋白酶溶液2ml，置20ml量瓶中，再用硼砂-氯化钙缓冲液（pH 8.0）稀释至刻度，摇匀，反应10分钟，置冰浴中（2小时内使用）。 测定法 取硼砂-氯化钙缓冲液（pH 8.0）9.0ml与底物溶液1.0ml，置25ml烧杯中，于25℃±0.5℃恒温水浴中放置3～5分钟，在搅拌下滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）调节pH值至8.0，精密加入供试品溶液（经25℃保温3～5分钟）1ml，并立即计时，用1ml微量滴定管以氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定释放出的酸，使溶液的pH值始终保持在7.9～8.1。每隔60秒读取pH值恰为8.0时所消耗的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）的体积（ml），共6分钟。另精密量取胰蛋白酶稀释液1ml，按上法操作，作为对照（重复一次）。以时间为横坐标，消耗的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）为纵坐标作图，应为一条直线。供试品和对照两条直线应基本重合，求出每秒钟消耗氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）的体积（ml），按下式计算。 每1mg抑肽酶的效价（单位）=（2n1-n2）4000?f/W 式中4000为系数； W为抑肽酶制成每1ml中约含1.67单位时的酶量，mg； n1为对照测定时每秒钟消耗的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）的体积，ml； n2为供试品溶液每秒钟消耗氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）的体积，ml； 2为供试品溶液中所加入胰蛋白酶的量为对照测定时的2倍； f为氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）校正因子。 效价单位定义 能抑制一个胰蛋白酶单位［每秒钟能水解1μmol的N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE）为一个胰蛋白酶单位（microkatal）］的活力称为一个抑肽酶活力单位（EPU）。每1EPU的抑肽酶相当于1800KIU。 抑肽酶活性是测定对已知活性的胰蛋白酶的抑制作用。用胰蛋白酶原有活性与残存活性间的差值计算活力单位。 【类别】蛋白酶抑制药。 【贮藏】遮光，严封保存。 【制剂】注射用抑肽酶 |
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