本品系用鼠疫杆菌的弱毒菌株经培养后收集菌体，加入稳定剂冻干制成。用于预防鼠疫。 1 基本要求 生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。 2 制造 2.1 菌种 生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理及质量控制”的有关规定。 2.1.1 名称及来源 采用鼠疫杆菌弱毒菌株EV株。 2.1.2 种子批的建立 应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理及质量控制”的有关规定。 2.1.3 种子批的传代 工作种子批菌种启开至疫苗生产，传代应不超过3代。 2.1.4 种子批的检定 2.1.4.1 培养特性 在琼脂平皿上，35~37℃培养44~48小时之菌落应为粗糙型，在肉汤培养基的液面有薄菌膜，管底有沉淀物，肉汤透明。 2.1.4.2 染色镜检 应为革兰氏阴性杆菌。 2.1.4.3 生化反应 发酵葡萄糖，产酸不产气；石蕊牛乳轻度变红；在甘油培养基内不产酸不产气（通则3605）。 2.1.4.4 噬菌体裂解试验 将EV菌种涂于琼脂平皿上，加入106以上的鼠疫噬菌体1滴，于28℃培养44~48小时，噬菌体流过处应无本菌生长。 2.1.4.5 特异性毒性试验 选用体重300~400g豚鼠3只，每只皮下注射含菌1.2×1010（于28~30℃培养44~48小时）的培养物。在注射后第6天解剖1只，第21天解剖2只。肉眼检查注射部位、脾、肝和肺，并用脾、肝、肺及心血进行培养，其中心血和肺经培养应无本菌生长。肉眼检查病变，注射部位可见充血，浸润变为脓疡，肝和脾可有丘疹状结节，肺部不应有鼠疫特异病变为合格。肺部如有显著病变时，应用同数量豚鼠复试，若仍有显著病变时，菌种应废弃。 2.1.4.6 免疫力试验 选用体重200~250g的豚鼠10只，每只皮下注射含菌7.0×105（于28~30℃培养44~48小时）的培养物，于20~25天后进行攻击，每只皮下感染鼠疫强毒菌200MLD。同时用3组豚鼠作对照，每组3只，各组豚鼠分别皮下注射0.5MLD、1MLD及2MLD的毒菌。免疫组及对照组至少观察25天。免疫动物存活不少于8只；而对照动物注射0.5MLD部分死亡，注射1MLD或2MLD全部死亡时，免疫力试验为合格。 2.1.5 种子批的保存 种子批应冻干保存于8℃及以下。 2.2 原液 2.2.1 生产用种子 2.2.1.1 第1代菌种 开启工作种子批菌种后，接种于经批准的培养基上培养，保存于2~8℃的第1代菌株可使用15天。 2.2.1.2 第2代菌种 将第1代菌种接种足够量的种子瓶制备第2代种子，培养物应进行纯菌检查。 2.2.1.3 第3代菌种 在第2代菌种不够的情况下，可用第2代种子制备第3代种子，并进行纯菌检查。 2.2.2 生产用培养基 采用厚金格尔琼脂培养基（pH6.8~7.2）或经批准的其他培养基。 2.2.3 接种和培养 将第2代或第3代生产用种子接种在生产用培养基上培养，逐瓶检查，有杂菌者废弃。 2.2.4 收获 用由蔗糖、明胶、硫脲、谷氨酸钠及尿素组成的稳定剂洗下菌苔（洗菌前弃去凝固水）或将菌苔刮入上述稳定剂内即为收获液，收获液进行纯菌检查，合格者合并制成原液。收获液和原液置2~8℃保存。 2.2.5 原液检定 按3.1项进行。 2.3 半成品 2.3.1 配制 根据3.1.2项测定的原液浓度，用稳定剂稀释至每1ml含菌1.6×1010。 2.3.2 半成品检定 按3.2项进行。 2.4 成品 2.4.1 分批 应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。 2.4.2 分装与冻干 应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。分装后应立即冻干，可真空封口，亦可充氮封口。 2.4.3 规格 按标示量复溶后每瓶0.5ml（10次人用剂量），含菌8.0×109；按标示量复溶后每瓶1.0ml（20次人用剂量），含菌1.6×1010。每1次人用剂量含活菌数应不低于2.0×108。 2.4.4 包装 应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。 3 检定 3.1 原液检定 3.1.1 纯菌检查 按通则1101方法做纯菌检查，生长物做涂片镜检，应符合鼠疫EV菌株特征，不得有杂菌。 3.1.2 浓度测定 用国家药品检定机构分发的浓度测定用参考品，以分光光度法或其他方法测定浓度。 3.2 半成品检定 纯菌检查 按3.1.1项进行。 3.3 成品检定 除装量差异和水分测定外，按标示量加入氯化钠注射液复溶后，进行其余各项检定。 3.3.1 鉴别试验 按2.1.4.4项进行。 3.3.2 物理检查 3.3.2.1 外观 应为白色或淡黄色疏松体，按标示量加入0.85%~0.90%氯化钠溶液后，应在半分钟内复溶，并呈均匀悬液。 3.3.2.2 装量差异 依法检查（通则0102），应符合规定。 3.3.3 水分 应不高于3.0%（通则0832）。 3.3.4 纯菌检查 3.3.4.1 按3.1.1项进行。 3.3.4.2 噬菌体裂解试验 取一支待检疫苗，加入0.5ml 0.85%~0.90%氯化钠溶液复溶，取复溶菌液120μl与120μl鼠疫噬菌体在1.5ml EP管中混合，接种2个营养琼脂培养基平皿，每个平皿接种100μl。用L型玻璃棒均匀涂抹后分别置20~25℃、30~35℃培养观察44~48小时，无杂菌生长判为合格。 3.3.5 菌落和菌形检查 应呈典型粗糙型菌落，涂片染色镜检，为革兰氏阴性杆菌。 3.3.6 浓度测定 用国家药品检定机构分发的浓度测定用参考品，以分光光度法测定，每1次人用剂量含菌数不高于9.5×108。 3.3.7 活菌数测定 取本品3瓶，混匀并稀释至菌数为1.0×103/ml，接种5个平皿，每个平皿接种0.1ml。均匀涂抹后置28~30℃培养2~3天。每1次人用剂量含活菌数应不低于2.0×108。 3.3.8 效力测定 取每5批疫苗中的首批进行效力测定。用体重250~300g豚鼠10只，每只皮下注射含菌5.0×107，注射后20~25天以200MLD的鼠疫毒菌进行皮下攻击。同时有3组豚鼠作对照，每组3只，分别于各组豚鼠皮下注射0.5MLD、1MLD和2MLD。各组动物于注射后，观察25天。免疫动物存活不少于8只；而对照组动物注射0.5MLD部分死亡，注射1MLD或2MLD全部死亡时，效力测定为合格。 3.3.9 特异性毒性检查 取体重250~350g豚鼠2只，每只皮下注射含菌1.2×1010的本品，第6天称体重，体重减轻应不超过20%，并取其中1只解剖，另1只观察到21天解剖。检查项目及要求同2.1.4.5项。 4 稀释剂 稀释剂为氯化钠注射液，稀释剂的生产应符合批准的要求，氯化钠注射液应符合本版药典（二部）的相关规定。 5 保存、运输及有效期 于2~8℃避光保存和运输。自生产之日起，有效期为12个月。 6 使用说明 应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定和批准的内容。 |
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