本法系依据活化的凝血因子在脑磷脂存在下，使缺血小板人血浆发生凝固的原理，将供试品和缺血小板人血浆及脑磷脂混合，测定凝固时间，根据凝固时间判定供试品是否含有活化的凝血因子。 试剂 （1）缺血小板人血浆 无菌采集人全血于3.8%枸橼酸钠抗凝剂（体积比9∶1）中，混匀，以每分钟1500转4℃离心30分钟，用塑料注射器取上层2/3的血浆，以每分钟3500转4℃离心30分钟，取上层2/3血浆，分装于塑料管中，每支3ml，保存于-40℃备用。 (2) 三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液（pH7.5） 称取三羟甲基氨基甲烷7.27g、氯化钠5.27g，加水溶解并稀释至1000ml（用盐酸调pH值至7.5）。 (3) 脑磷脂混悬液 冻干脑磷脂加水复溶，量取适量用0.85%～0.90%氯化钠溶液稀释，稀释后的脑磷脂混悬液应使空白凝固时间在200～300秒。 (4) 0.025mol/L氯化钙溶液 称取氯化钙（CaCl2?2H2O）147g溶于1000ml水中，制成1mol/L氯化钙贮备液。临用时，用水将1mol/L氯化钙贮备液稀释40倍。 (5) 硫酸鱼精蛋白溶液 称取硫酸鱼精蛋白适量，用 p H7.5的Tris缓冲液溶解并稀释成适宜浓度的溶液。 供试品溶液的制备 取复溶后的供试品，根据测得的肝素含量（通则3424）加硫酸鱼精蛋白溶液适量，中和供试品中的肝素（10μg硫酸鱼精蛋白中和1IU肝素），再用Tris缓冲液（pH7.5）稀释10倍和100倍。 测定法 取缺血小板人血浆0.1ml，加脑磷脂混悬液0.1ml，混匀，37℃放置1分钟，加供试品溶液（10倍或100倍稀释液）0.1ml、已预热至37℃的0.025mol/L氯化钙溶液0.1ml，记录凝固时间。用Tris缓冲液（pH7.5）0.1ml替代供试品溶液，同法操作，作空白对照。 结果判定 空白对照凝固时间不低于200秒，试验成立。1∶10和1∶100供试品稀释液凝固时间均应不低于150秒。 【附注】（1）直接与血和血浆接触的器具应为塑料制品或硅化的玻璃制品。从供试品稀释到测定完毕应在30分钟内完成。 （2）供试品每个稀释度做2管。 |
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