本法用于测定细菌荚膜多糖在色谱柱中的分配系数(KD)和多糖在规定KD值以前的回收率。 试剂、色谱柱的制备与色谱柱标定 同通则3419第二法。 测定法 取供试品约1ml(含多糖抗原3~5mg),加至已标定的色谱柱中,用流动相洗脱,流速为每小时15~20ml,用组分收集器收集洗脱液,每管3~5ml。照O-乙酰基测定法(通则3117),测定每管洗脱液中O-乙酰基的含量,求出O-乙酰基含量最高时的洗脱体积,即为多糖主峰峰顶洗脱体积Ve。 按下式计算∶ 式中KD为供试品分配系数; Ve为供试品洗脱液体积,ml; Vo为空流体积,ml; Vi为柱床体积,ml。 计算供试品在KD值≤0.25的多糖回收率∶ 式中Rx为KD值≤0.25供试品的多糖回收率,%; Ax为供试品在KD值≤0.25各管洗脱液等体积合并液的O-乙酰基含量; At为供试品所有管洗脱液等体积合并液的O-乙酰基含量。 【附注】过柱操作在10~20℃进行。 |