本法系依据绵羊红细胞经醛化和糅酸化处理后,具有较强的吸附蛋白质的能力,能将白喉类毒素吸附于红细胞表面上,若遇到供试品中相应抗体,会发生抗原抗体结合,产生特异性凝集,通过比较凝集反应终点测定供试品中白喉抗体效价。 试剂 (1)1%兔血清生理氯化钠溶液 无菌采集兔全血,分离血清,置56℃、30分钟灭能。取0.5ml兔血清加49.5ml生理氯化钠溶液,混匀。 (2)白喉抗体诊断红细胞悬液用 1%兔血清生理氯化钠溶液复溶冻干白喉抗体诊断红细胞至5%悬液。 白喉抗体标准品溶液的制备 用1%兔血清生理氯化钠溶液将白喉抗体标准品稀释至每1ml含0.2HAU。 供试品溶液的制备 用1%兔血清生理氯化钠溶液将供试品稀释4倍。 测定法 在UV型血凝板上,用1%兔血清生理氯化钠溶液将供试品溶液做2倍系列稀释,每孔留25μl,再向每孔加25μl白喉抗体诊断红细胞悬液,置振荡器混匀30~60秒,放湿盒内37℃结合1小时。 在UV型血凝板上,用1%兔血清生理氯化钠溶液将白喉抗体标准品溶液做2倍系列稀释,每孔留25μl。自“再向每孔加25μl白喉抗体诊断红细胞悬液”起,同法操作。 在UV型血凝板上,加1%兔血清生理氯化钠溶液25μl,自“再向每孔加25 μl白喉抗体诊断红细胞悬液”起,同法操作,为阴性对照。 阴性对照孔呈典型的“-',否则试验不成立,应重试。以出现'++'为判定终点,按下式计算供试品白喉抗体效价: 式中E为出现“++”的最高稀释倍数的标准品的白喉抗体效价,HAU/ml; n为出现“++'的供试品的最高稀释倍数; F为静注人免疫球蛋白供试品蛋白质含量,g/ml;或人免疫球蛋白供试品蛋白质含量,g/ml。 【附注】(1)判定标准 ”-”红细胞集中在孔底中央,呈一边缘光滑致密的小红点; ”+'大部分红细胞沉于孔底中央,周围有少量的红细胞; ”++'红细胞部分凝集,孔底中央有一疏松的小红圈; ”+++”大部分红细胞凝集呈均匀分布,孔底中央有很弱的小红圈; '++++”红细胞凝集呈均匀分布。 (2)血凝板孔要保持清洁干净,避免表面磨损,否则红细胞不易下沉,易出现假阳性。 |