本品系从新鲜人尿中提取的一种能抑制多种蛋白水解酶活力的糖蛋白溶液。每1ml中含乌司他丁的活力不得少于10万单位，每1mg蛋白中含乌司他丁的活力不得少于3500单位。 【制法要求】本品应从健康人群的尿中提取，生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》要求。本品在生产过程中应有病毒安全性控制的措施，工艺中需经60℃加热10小时，以使病毒灭活。 【性状】本品为无色至黄色的澄清液体;无臭。 【鉴别】（1）取本品，用水稀释制成每1ml中含1000单位的溶液，取0.5ml，加5%苯酚溶液0.5ml，摇匀，加硫酸2.5ml，摇匀，溶液显橙黄色。 （2）取本品，用效价测定项下的0.2mol/L三乙醇胺缓冲液（pH7.8）稀释制成每1ml中含200单位的溶液，作为供试品溶液。取试管1支，加上述缓冲液1.6ml、供试品溶液0.2ml与效价测定项下的胰蛋白酶溶液0.2ml，摇匀，置25℃水浴保温5分钟，加效价测定项下的底物溶液1.0ml，摇匀，置25℃水浴继续保温5分钟，溶液应无色。另取试管1支，以上述缓冲液0.2ml代替供试品溶液，同法操作，溶液应显黄色。 （3）取本品，用水稀释制成每1ml中含2000单位的溶液，照紫外-可见分光光度法（通则0401）测定，在277nm的波长处有最大吸收。 （4）取本品，用0.9%氯化钠溶液稀释制成每1ml中含500单位的溶液。用硼酸-氢氧化钠缓冲液（pH8.4）（取硼酸24.736g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液溶解并稀释至1000ml）制备1.2%琼脂糖凝胶板，照免疫双扩散法（通则3403）检查，应与兔抗乌司他丁血清形成明显的沉淀线。 【检查】酸碱度 取本品，用水稀释制成每1ml中含10 000单位的溶液，依法测定（通则0631），pH值应为6.0～7.5。 溶液的澄清度与颜色 取本品，用0.9%氯化钠溶液稀释制成每1ml中含20 000单位的溶液，依法检查（通则0901第一法和通则0902第一法），溶液应澄清无色；如显色，与黄色1号标准比色液比较，不得更深。 激肽原酶物质 照紫外-可见分光光度法（通则0401）测定。 底物溶液 取S-2266（相当于H-D-Val-Leu-Arg-PNA?2HCl）25mg，加水溶解并稀释制成0.0015mol/L的溶液，置一18℃保存。 供试品溶液 取本品，用水稀释制成每1ml中约含50 000单位的溶液。 测定法 取试管2支，各精密加入供试品溶液0.4ml，再分别加入0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液（取三羟甲基氨基甲烷24.228g，加水800ml溶解，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0，加水至1000ml）0.5ml，混匀，置37℃±0.5℃水浴中保温5分钟，再于第1管中加冰醋酸溶液（1→2）0.1ml，第2管中加底物溶液0.1ml，立即摇匀，并计时，置37℃±0.5℃水浴中准确反应30分钟，第1管加底物溶液0.1ml，第2管加冰醋酸溶液（1→2）0.1ml，以第1管为空白，在405nm的波长处测定第2管的吸光度。 限度 吸光度不得过0.03。 分子量 取本品适量，用水稀释制成每1ml中含2mg蛋白的溶液，加入等体积的供试品缓冲液，混匀，置水浴中5分钟，放冷，作为供试品溶液；另取分子量标准品（分子量为10 000～100 000标准蛋白质）适量，加供试品缓冲液制成每1μl中含1μg的溶液，置水浴中5分钟，放冷，作为分子量标准品溶液。照电泳法（通则0541第五法还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法），考马斯亮蓝染色测定，分离胶浓度为12.5%。加样量不低于10μg。分子量应为37 000～43 000。 有关物质 照分子排阻色谱法（通则0514）测定。 供试品溶液 取本品，用流动相稀释制成每1ml中约含10 000单位的溶液。 对照溶液 精密量取供试品溶液1mL，置200ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。 系统适用性溶液 取供试品溶液适量，于105℃加热3小时，放冷，加入等体积的供试品溶液，混匀。 灵敏度溶液 取对照溶液10ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。 色谱条件 以亲水改性硅胶为填充剂（TSKgel G3000SWXL，7.8mm×300mm，5μm或其他适宜色谱柱）；以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠6.90g、磷酸氢二钠17.91g及氯化钠8.77g，加水800ml溶解，调节pH值至6.8，加水至1000ml）为流动相；流速为每分钟0.7ml；检测波长为280nm；进样体积50μl。 系统适用性要求 系统适用性溶液色谱图中，乌司他丁峰与相邻杂质峰间的分离度应符合要求，理论板数按乌司他丁峰计算不低于800。灵敏度溶液色谱图中，乌司他丁峰高的信噪比应大于10。 测定法 精密量取供试品溶液与对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。 限度 供试品溶液色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的4倍（2.0%）。 重金属 取本品适量（约相当于乌司他丁50万单位），用水稀释制成每1ml中约含乌司他丁5万单位的溶液，取10ml依法检查（通则0821第二法），每1ml中含重金属不得过10μg。 乙肝表面抗原 取本品，用0.9%氯化钠溶液定量稀释制成每1ml中约含10万单位的溶液，按试剂盒说明书测定，应为阴性。 异常毒性 取本品，用氯化钠注射液定量稀释制成每1ml中约含乌司他丁45 000单位的溶液，依法检查（通则1141），应符合规定。 细菌内毒素 取本品，依法检查（通则1143），每10 000单位乌司他丁中含内毒素的量应小于0.625EU。 凝血质样活性物质 血浆的制备 取新鲜兔血，置预先放有3.8%枸椽酸钠溶液的容器（枸椽酸钠溶液与血液容积之比为1∶9）中，混匀，在2～8℃条件下，以每分钟3500转离心20分钟。取上清液在一20℃保存备用，用前在25℃水浴融化。 测定法 取本品，用巴比妥缓冲液（pH7.4）稀释制成每1ml中含5000单位的供试品溶液。取试管[（10～12）mm×75mm]2支，第1管加巴比妥缓冲液（pH7.4）0.1ml作空白对照，第2管加供试品溶液0.1ml，分别加兔血浆0.1ml，置25℃±0.5℃水浴中保温5分钟，迅速加入0.37%氯化钙溶液0.1ml，混匀，计时。观察并记录试管出现混浊（初凝）的时间。供试品管的初凝时间应不小于空白对照管的初凝时间。 【效价测定】效价 照紫外-可见分光光度法（通则0401）测定。 胰蛋白酶溶液 临用新制，并置冰浴保存。精密称取结晶胰蛋白酶（每1mg含7500～10 000BAEE单位）适量，用冷的氯化钙盐酸溶液（取氯化钙2.94g，加0.001mol/L盐酸溶液1000ml溶解）溶解并稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液。 底物溶液 临用新制，并置暗处保存。取苯甲酰-L-精氨酸-p-对硝基苯胺盐酸盐适量，加水溶解并稀释制成每1ml中含1mg的溶液。 0.2mol/L三乙醇胺缓冲液（pH7.8）取三乙醇胺29.8g，加水900ml溶解，用4mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8，加水至1000ml。 供试品溶液 精密量取本品适量，用0.2mol/L三乙醇胺缓冲液（pH7.8）定量稀释制成每1ml中约含50单位的溶液。 标准品溶液 取乌司他丁标准品，加0.2mol/L三乙醇胺缓冲液（pH7.8）溶解并定量稀释制成每1ml中约含50单位的溶液。 测定法 取0.2mol/L三乙醇胺缓冲液（pH7.8）（预热至25℃±1℃）1.6ml，置比色池中，加标准品溶液与胰蛋白酶溶液各0.2ml，混匀，准确保温5分钟，使比色池内温度保持在25℃±1℃，加底物溶液（预热至25℃±1℃）1.0ml，立即摇匀并计时，以水为空白，在405nm的波长处，每隔1分钟测定吸光度，共5分钟，吸光度的变化率应恒定。以反应时间为横坐标，吸光度为纵坐标作图，求出每1分钟的吸光度变化率（△As）。 分别取0.2mol/L三乙醇胺缓冲液（pH7.8）与供试品溶液各0.2ml，代替标准品溶液同法操作，求出吸光度变化率△A0和△At，按下式计算： 式中 △A0为三乙醇胺缓冲液吸光度的变化率； △At为供试品溶液吸光度的变化率； △As为标准品溶液吸光度的变化率； U为每1ml标准品溶液中含乌司他丁单位数； V为供试品取样量，ml； n为供试品的稀释倍数。 测得的效价应为估计效价的90%～110%，否则应调整供试品溶液的浓度重新测定。 蛋白质含量 精密量取本品适量，照蛋白质含量测定法（通则0731第一法）测定每1ml中蛋白质含量，即得。 比活 由测得的效价和蛋白质含量计算每1mg蛋白中含乌司他丁活力的单位数。 【类别】蛋白酶抑制药。 【贮藏】密封，在一20℃以下保存。 【制剂】注射用乌司他丁 |
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